प्रोटीनेस के, पुनः संयोजक

विवरण

सामान्य विवरण

प्रोटीनेस के सबटिलिसिन से संबंधित सेरीन प्रोटीज है। पुनः संयोजक एंजाइम मूल प्रोटीज के समान है जो मूल रूप से मोल्ड  ट्रिटिराचियम एल्बम से अलग है । पुनः संयोजक एंजाइम के विनिर्देश देशी प्रोटीज के समान हैं। अमीनो एसिड अनुक्रम (आणविक भार) और अणु संरचना समान हैं। हालांकि, पुनः संयोजक तैयारी देशी एंजाइम की तुलना में अधिक शुद्ध है, क्योंकि यह डीएनए मुक्त है जिसमें कोई स्पष्ट दरार विशिष्टता नहीं है। एंजाइम देशी प्रोटीन पर बेहद प्रभावी है और इसलिए इसका उपयोग अंतर्जात न्यूक्लियस जैसे RNases और DNases को तेजी से निष्क्रिय करने के लिए किया जा सकता है। एंजाइम एक समाधान के रूप में भी उपलब्ध है। 

  • मैं nhibitors : एंजाइम Pefabloc द्वारा निष्क्रिय है  अनुसूचित जाति। हालांकि, यह धातु आयनों, chelating एजेंटों (जैसे, EDTA), सल्फ़हाइड्रील अभिकर्मकों, या ट्रिप्सिन और काइमोट्रिप्सिन अवरोधकों द्वारा निष्क्रिय नहीं है।
  • एक्टिवेटर्स : डिनाट्यूरिंग एजेंट्स (एसडीएस और यूरिया) की उपस्थिति से प्रोटीनेज़ के गतिविधि उत्तेजित होती है।
  • पीएच इष्टतम : प्रोटीनेज़ के एक विस्तृत पीएच रेंज (4 – 12.5) पर स्थिर है। 6.5 और 9.5 के बीच pH पर इनक्यूबेट करने पर एंजाइम कई घंटों तक पूरी गतिविधि बनाए रखता है।
  • वॉल्यूम गतिविधि :

लगभग २.५ यू/मिलीग्राम लियोफिलिजेट (क्रोमोजाइम परख)
लगभग ३० यू/मिलीग्राम लियोफिलिजेट (हीमोग्लोबिन परख)

नोट:  एसडीएस प्रोटीनेज़ के की गतिविधि को सात गुना तक बढ़ा सकता है।

विशेषता

प्रोटीनेस के ज्ञात सबसे सक्रिय एंडोपेप्टिडेस में से एक है और किसी भी स्पष्ट दरार विशिष्टता को प्रदर्शित नहीं करता है। प्रोटीनेज़ K प्रोटीन को इस प्रकार से साफ़ करता है: X-↓-Y, जहाँ X = स्निग्ध, सुगंधित, या हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड, और Y = कोई भी अमीनो एसिड। बड़ी मात्रा में और लंबी ऊष्मायन अवधि में उपयोग किए जाने पर एंजाइम प्रोटीन सामग्री को मुक्त अमीनो एसिड में तोड़ सकता है।
Proteinase K grade
Proteinase K grade

आवेदन

प्रोटीनेस के ज्ञात सबसे सक्रिय एंडोपेप्टिडेस में से एक है। यह पीसीआर ग्रेड प्रोटीनेज़ के विशेष रूप से प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं के लिए न्यूक्लिक एसिड को अलग करने के लिए उपयुक्त है, साथ ही: 

  • एंजाइम देशी प्रोटीन पर बेहद प्रभावी है और इसलिए न्यूक्लिक एसिड अलगाव के दौरान RNases और DNases जैसे अंतर्जात न्यूक्लियस को तेजी से निष्क्रिय करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। यह गुण प्रोटीनेस के को विशेष रूप से ऊतकों या सेल लाइनों से देशी आरएनए और डीएनए के अलगाव के लिए उपयुक्त बनाता है।
  • एंजाइम एक जीवाणु ऑटोलिटिक कारक को सक्रिय करके सेल लसीका को बढ़ावा देता है।
  • प्रोटीनेज़ K का उपयोग कोशिका सतहों पर प्रोटीन और ग्लाइकोप्रोटीन को संशोधित करके झिल्ली संरचनाओं के विश्लेषण के लिए किया जाता है।
  • क्योंकि एंजाइम का परीक्षण RNases और DNases की अनुपस्थिति के लिए किया जाता है, और वस्तुतः डीएनए से मुक्त होता है, यह PCR और RT-PCR टेम्प्लेट को अलग करने के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है।
  • प्रोटीनस के का उपयोग कॉलोनी लिफ्टों की तैयारी के दौरान सेलुलर मलबे को हटाने के लिए भी किया जा सकता है, और स्वस्थानी  संकरण के दौरान कुशल जांच घुसपैठ सुनिश्चित करने के लिए ऊतक वर्गों का इलाज करने के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है  ।

विशेषतायें एवं फायदे

प्रोटीनेस के एक सेरीन प्रोटीज है जिसमें कोई स्पष्ट दरार विशिष्टता नहीं है। यह अमीनो एसिड X और Y (X-↓-Y) के बीच प्रोटीन को साफ करता है, जब X = एक स्निग्ध, सुगंधित, या हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड, और Y = कोई भी अमीनो एसिड होता है। एंजाइम देशी प्रोटीन पर बेहद प्रभावी है और इसलिए इसका उपयोग अंतर्जात न्यूक्लियस जैसे RNases और DNases को तेजी से निष्क्रिय करने के लिए किया जा सकता है। 

  • टेम्पलेट तैयार करने के लिए एक प्रभावी उपकरण चुनें । अधिकांश प्रजातियों के DNases और RNases को निष्क्रिय करें।
  • लगातार गुणवत्ता और प्रदर्शन पर भरोसा करें । सख्त गुणवत्ता परीक्षण इष्टतम स्थिरता और उच्च-स्तरीय लॉट-टू-लॉट प्रदर्शन सुनिश्चित करता है।
  • परिस्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला में नमूने तैयार करें । मजबूत एंजाइम एक विस्तृत पीएच रेंज पर स्थिर है और विविध अनुप्रयोगों के लिए आदर्श है।
  • एक संदूषण मुक्त एंजाइम से लाभ । एंजाइम का परीक्षण RNases और DNases की अनुपस्थिति के लिए किया जाता है, और वस्तुतः डीएनए से मुक्त होता है। यह पीसीआर टेम्पलेट्स के अलगाव के लिए विशेष रूप से अनुकूल है।

नोट:  एंजाइम प्रोटीन को मुक्त अमीनो एसिड में कम कर सकता है यदि यह लंबी ऊष्मायन अवधि के लिए बड़ी मात्रा में मौजूद है।

सामग्री
Lyophilizate PCR ग्रेड प्रोटीनस K भी घोल में उपलब्ध है।

गुणवत्ता

वर्तमान गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रियाओं के अनुसार, यह तैयारी RNases, DNases और DNA से मुक्त है। 

  • न्यूक्लीज़ की अनुपस्थिति : एंडोन्यूक्लिज़, एक्सोन्यूक्लिज़, राइबोन्यूक्लिज़ और निकिंग गतिविधि की अनुपस्थिति को सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक लॉट का विभिन्न सबस्ट्रेट्स पर परीक्षण किया जाता है।
  • डीएनए सामग्री : =10 पीजी/मिलीग्राम एंजाइम (सीमा द्वारा निर्धारित)
  • बायोबर्डन : <125 cfu/g (यूरोपीय फार्माकोपिया से सबसे कड़े परीक्षण द्वारा निर्धारित, जो व्यवहार्य एरोबिक बैक्टीरिया, खमीर और कवक की कुल संख्या की पहचान करता है)

तैयारी नोट

उत्प्रेरक:  प्रोटीनेस के गतिविधि को प्रोत्साहित करने के लिए, विकृतीकरण एजेंट (एसडीएस और यूरिया) जोड़ें। उदाहरण के लिए, एसडीएस की अनुपस्थिति में प्रदर्शित गतिविधि की तुलना में एसडीएस प्रोटीनएज़ के की गतिविधि को सात गुना तक बढ़ा सकता है।
कार्य समाधान:  सर्वोत्तम परिणामों के लिए, डबल-डिस्टिल्ड वॉटर या ट्रिस बफर में प्रोटीनेज़ के, पुनः संयोजक, पीसीआर ग्रेड को भंग कर दें। प्रोटीनएज़ के के लिए सबसे अच्छा बफर आवेदन से अलग-अलग होगा। पैरामीटर क्षेत्र में हमेशा पीएच और तापमान दिशानिर्देशों का पालन करें। एक सामान्य नियम के रूप में, प्रोटीनएज़ के बफर में स्थिर और बहुत सक्रिय होता है जिसमें यूरिया, सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस), और गनीडिनियम लवण जैसे विकृतीकरण अभिकर्मक होते हैं।
भंडारण की स्थिति (कार्य समाधान):  -15 से -25 डिग्री सेल्सियस °

पुनर्गठन

डबल जिले में पुनर्गठन। पानी कम से कम 20 मिलीग्राम/एमएल . तक

अन्य नोट

केवल जीवन विज्ञान अनुसंधान के लिए। नैदानिक ​​प्रक्रियाओं के उपयोग में नहीं।
Lyophilizate PCR ग्रेड प्रोटीनस K भी घोल में उपलब्ध है।
थर्मो साइंटिफिक प्रोटीनेज K एक व्यापक श्रेणी का एंडोलिटिक प्रोटीज है जिसका व्यापक रूप से न्यूक्लिक एसिड की तैयारी में प्रोटीन के पाचन के लिए उपयोग किया जाता है। यह डिटर्जेंट की उपस्थिति में भी प्रोटीन का क्षरण करता है। प्रोटीनेज़ K स्निग्ध, सुगंधित, या हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड के कार्बोक्जिलिक पक्षों पर पेप्टाइड बॉन्ड को साफ करता है। प्रोटीनेस के को सेरीन प्रोटीज के रूप में वर्गीकृत किया गया है। इस एंजाइम द्वारा हाइड्रोलाइज्ड होने वाला सबसे छोटा पेप्टाइड टेट्रापेप्टाइड है।

मुख्य विशेषताएं:

• उपयोग के लिए तैयार समाधान
• प्रतिक्रिया स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला में सक्रिय

अनुप्रयोग:

• माउस पूंछ
से जीनोमिक डीएनए का अलगाव • संवर्धित कोशिकाओं से जीनोमिक डीएनए का अलगाव
• डीएनए और आरएनए को ऊतकों से अलग करते समय डीएनए और आरएनए को हटाना या कोशिका रेखाएँ
• एंजाइम स्थानीयकरण का निर्धारण
• पीसीआर उत्पादों की क्लोनिंग दक्षता में सुधार

नोट:

• प्रोटीनेस के की अनुशंसित कामकाजी एकाग्रता 0.05 से 1 मिलीग्राम/एमएल है। एंजाइम की गतिविधि 0.2 से 1% एसडीएस या 1 से 4 एम यूरिया द्वारा उत्तेजित होती है
• सीए2+ प्रोटीनेज़ के को ऑटोलिसिस से बचाता है, थर्मल स्थिरता को बढ़ाता है, और प्रोटीन के के सब्सट्रेट बाइंडिंग साइट के लिए एक नियामक कार्य करता है
• एक से अधिक स्थिर विस्तृत पीएच रेंज: 4.0 से 12.5, इष्टतम पीएच 7.5 से 8.0
• 50 से 55 डिग्री सेल्सियस पर इष्टतम गतिविधि
• 65 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर एंजाइम का तेजी से विकृतीकरण होता है

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