ProAdhere 293T कोशिकाओं
(बिल्ली संख्या LV592) के लिए सेल संस्कृति निर्देश
फ्रीज-पिघलना वसूली
1. एक ३७ डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में पूर्व गर्म पूरा मीडिया।
2. तरल नाइट्रोजन भंडारण टैंक से cryopreserved शीशी निकालें।
3. शीशी के निचले आधे हिस्से को 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में रखकर कोशिकाओं को जल्दी से पिघलाएं और
60 सेकंड के बाद हटा दें। विगलन के बाद भी कुछ बर्फ के क्रिस्टल शेष रह जाने चाहिए। यह
महत्वपूर्ण है कि क्रायोवियल को अधिक न पिघलाएं क्योंकि डीएमएसओ की उपस्थिति कोशिकाओं के लिए विषाक्त है।
4. शीशी में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें और सेल निलंबन को
5 एमएल पूर्ण मीडिया युक्त 15 एमएल बाँझ शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें ।
5. गोली के लिए 3 मिनट के लिए 1500 आरपीएम पर कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज करें।
6. मीडिया को बाहर निकालो, सेल गोली को अबाधित छोड़कर।
7. नए कल्चर वेसल में फ्रेश कम्पलीट मीडियम और प्लेट में पेलेट को फिर से सस्पेंड करें।
8. 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट संस्कृतियों, 5% सीओ2।

 

उपसंस्कृति
1. संस्कृति माध्यम को निकालें और त्यागें।
2. पूरे संस्कृति पोत को कवर करने के लिए पर्याप्त ट्रिप्सिन-ईडीटीए समाधान (टीएम050) जोड़ें और
एक उल्टे माइक्रोस्कोप के तहत कोशिकाओं का निरीक्षण करें जब तक कि सेल परत फैल न जाए।
ट्रिप्सिन-ईडीटीए की मात्रा संस्कृति पोत के आकार के आधार पर भिन्न होती है (यानी
६० मिमी संस्कृति डिश के लिए २.० मिलीलीटर की सिफारिश की जाती है)।
नोट: जिन कोशिकाओं को अलग करना मुश्किल है उन्हें फैलाव की सुविधा के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जा सकता है।
3. एंजाइमी प्रतिक्रिया को रोकने के लिए पूर्ण मीडिया की समान मात्रा जोड़ें और सभी कोशिकाओं
को 15 एमएल बाँझ शंक्वाकार ट्यूब में एकत्र करें ।
4. गोली के लिए 3 मिनट के लिए 1500 आरपीएम पर कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज करें।
5. ट्रिप्सिन बाहर महाप्राण, गोली अबाधित छोड़कर।
6. ताजा पूर्ण माध्यम में गोली फिर से निलंबित करें और नई संस्कृति पोत में प्लेट।
7. 37 डिग्री सेल्सियस, 5% सीओ2 पर इनक्यूबेट संस्कृतियों।
परिरक्षण
फ्रीज माध्यम: 10% डीएमएसओ के साथ पूर्ण विकास माध्यम।
भंडारण तापमान: तरल नाइट्रोजन वाष्प चरण।

 

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